Эта статья входит в число добротных статей

Секвенирование РНК (Vytfyunjkfguny JUT)

Перейти к навигации Перейти к поиску

Секвени́рование РНК (англ. RNA sequencing, RNA-seq) — метод определения первичной структуры молекул РНК, представляющий собой высокочувствительный и точный инструмент для изучения транскриптома. Под этим может подразумеваться как секвенирование мРНК, так и определение последовательности некодирующих РНК. Современное полногеномное секвенирование основано на прямом секвенировании фрагментов кДНК[1].

В отличие от другого широкомасштабного метода анализа транскриптома — экспрессионных микрочипов, РНК-секвенирование позволяет получать данные об аллель-специфичной экспрессии генов, сплайсинговых вариантах транскриптов, пост- и ко-трансляционном редактировании РНК, однонуклеотидных полиморфизмах, а также химерных генах. Кроме того, РНК-секвенирование позволяет получить абсолютную количественную информацию о представленности различных транскриптов в пробе, в отличие от относительных количественных данных микрочипов[2][3].

Совершенствование технологий секвенирования РНК наряду с развитием секвенирования РНК одиночных клеток (англ. single-cell RNA-seq) позволяет более детально изучать этиологию и патогенез различных заболеваний[4][5].

История

[править | править код]

Технологическая платформа для быстрого широкомасштабного секвенирования была создана в 2005 году фирмами 454 Life Sciences[6] и Illumina (ранее Solexa)[7], и сначала использовалась для секвенирования геномов[англ.]. Первые работы по секвенированию транскриптомов появились в 2008 году. В числе первых были секвенированы транскриптом дрожжей[8], арабидопсиса[9] и мыши[10].

В настоящее время РНК-секвенирование осуществляется в основном с использованием трех инструментальных платформ широкомасштабного секвенирования: Illumina, 454 Life Sciences и SOLiD[11].

В 2019 году удалось секвенировать РНК из кожи, хрящей, печени и скелетных мышц щенка Тумата (волка или собаки) возрастом 14300 лет[12].

Методы

[править | править код]

Основные принципы секвенирования РНК

[править | править код]

Большинство экспериментов по секвенированию РНК проводятся на оборудовании, которое предназначено для секвенирования молекул ДНК. В связи с этим необходимым шагом для секвенирования РНК является создание библиотеки кДНК, полученной из исследуемой тотальной РНК. Каждая кДНК из такой библиотеки представляет собой фрагмент ДНК разного размера, фланкированный по обоим краям специальными адаптерами[англ.]. Наличие адаптеров необходимо для последующей амплификации образцов и секвенирования. Методы создания библиотек кДНК[англ.] варьируются в зависимости от конечной цели исследования и типа изучаемой РНК (РНК может различаться в размере, последовательности, структурных особенностях а также в концентрации). Перед созданием библиотеки кДНК, подходящей для конкретного эксперимента, необходимо ответить на следующие вопросы: 1) какие именно молекулы РНК представляют интерес; 2) как получить кДНК желаемого размера; 3) каким способом лучше присоединить адаптерные последовательности к краям кДНК для амплификации и секвенирования[13].

Общая схема секвенирования РНК.

Создание библиотеки поли(А)-транскриптов

[править | править код]

Секвенирование полиаденилированной РНК находит широкое применение в секвенировании РНК. У эукариот большая часть белок-кодирующих РНК (мРНК) и длинных некодирующих РНК (РНК длиной более 200 пар оснований (п. о.)) содержат поли-(А)-хвосты. Наличие поли-(А)-хвоста делает технически простым обогащение препарата суммарной РНК поли-(А)-содержащими РНК (1—5 % от всей суммарной клеточной РНК). Отбор поли-А содержащих РНК можно производить с помощью магнитных или целлюлозных бусин, покрытых праймерами, содержащими олиго-dT-участки[13]. Веб-сайт «The Protocol Online»[14] предоставляет список нескольких протоколов, относящихся к выделению мРНК.

Удаление рибосомной РНК

[править | править код]

Неполиаденилированные РНК, такие как мРНК прокариот, фрагменты мРНК, полученные из препаратов, зафиксированных формалином, и транскрипты без поли-(А)-хвостов у эукариот, зачастую являются объектами исследований. Самая большая трудность в секвенировании таких РНК заключается в необходимости очистить суммарную РНК от рибосомной РНК (рРНК), которая превалирует в образце (например, в активно делящихся клетках млекопитающих количество рРНК от суммарной РНК может доходить до 80 %[15])[13]. Существует несколько способов элиминации рРНК:

  1. Первый подход основан на специфичных к последовательностям пробах, которые могут быть гибридизованы с рРНК. Нежелательные рРНК или их кДНК гибридизуют с биотинилированной ДНК или же с пробами, содержащими «закрытые» нуклеиновые кислоты (англ. locked nucleic acid, LNA), и затем проводят очистку на стрептавидиновых бусинах. В другом методе (методе направленной деградации (англ. probe-directed degradation, PDD[16]) рРНК помечаются антисмысловыми олиго-ДНК-праймерами и обрабатываются РНКазой Н. В третьем методе из всех кДНК, полученных и с рРНК и с других РНК, делают кольцевые молекулы, а затем гибридизуют с пробами, содержащими рРНК. Гибридизованные последовательности расщепляются при последующей обработке дуплекс-специфической нуклеазой (англ. duplex-specific nuclease, DSN), которая обладает специфичностью к двуцепочечной ДНК. Последний метод имеет ограничения ввиду необходимости большого количества РНК[17].
  2. Другой подход избавления от рРНК основан на использовании специфических праймеров NSR (англ. not-so-random (NSR) primers), которые связываются только с интересующими молекулами РНК во время обратной транскрипции при получении кДНК. Данный метод, запущенный на рынок под названием Ovation компанией NuGEN, использует гексамерные или гептамерные праймеры, последовательности которых отсутствуют в рРНК. Одним из самых ярких преимуществ данного метода является хорошая работа праймеров NSR в отношении частично деградированной РНК, а также с количественно малыми образцами. Очень часто данный подход используют при изучении транскриптомов прокариот, так как создание библиотеки поли-(А)-содержащих РНК в этом случае невозможно ввиду отсутствия полиаденилирования РНК у прокариот[13].
  3. К третьей группе можно отнести методы, которые используют некоторые особенности рРНК для её последующего удаления. Так, первый метод, известный как СоТ-гибридизация, основан на тепловой денатурации, отжиге и селективной деградации с помощью дуплекс-специфической нуклеазы. Двуцепочечные кДНК, полученные с РНК, превалирующей в образце, будут избирательно подвергаться деградации за счет более быстрой кинетики отжига по сравнению с другой РНК, которой в образце намного меньше. Второй метод основан на использовании фермента TEX[18] (англ. terminator 5'-phosphate exonuclease), который узнает молекулы РНК, имеющие на 5'-конце фосфат, как у рРНК и тРНК[19].

Фрагментация

[править | править код]

После процедуры создания библиотеки поли-(А)-транскриптов либо процедуры удаления рРНК образцы РНК подвергаются фрагментации (обычно перед проведением обратной транскрипции все образцы РНК делаются одинакового размера). Отчасти это обусловлено ограниченными возможностями секвенирующих платформ. Так например, Illumina позволяет секвенировать образцы размером до 1500 п. о. В качестве альтернативы можно не фрагментировать РНК, а сначала сделать из неё кДНК, а затем уже полученную кДНК подвергнуть фрагментации[13].

Адаптеры и направление цепей

[править | править код]

В стандартных протоколах по созданию библиотек для секвенирования РНК перед амплификацией и секвенированием к кДНК желаемого размера лигируются ДНК-адаптеры. Несмотря на простоту, в данном подходе теряется информация о том, какая из цепей ДНК соответствует смысловой цепи РНК. Особенно это критично в исследованиях для поиска и идентификации антисмысловых и новых видов РНК. В связи с этим разработаны несколько методов, которые позволяют выявить направление цепи молекул РНК в соответствующей библиотеке кДНК[13].

  1. Первый подход подразумевает присоединение разных адаптеров непосредственно к 5'-концу и к 3'-концу РНК . Изначально этот метод был создан для секвенирования микроРНК. Сначала у фрагментированной РНК убирается фосфатная группа с 3'-конца, а на 5'-конец, наоборот, навешивается. Данная процедура сопровождается последовательным лигированием 5'-аденилированного 3' адаптера с помощью T4 РНК лигазы II и присоединением 5'-адаптера с помощью T4 РНК лигазы I. Различие в адаптерах на разных концах РНК сохраняет информацию о её направлении (имеется в виду, что после проведения процедуры обратной транскрипции информация о том, какая их цепей кДНК соответствует исходной последовательности РНК, сохранится)[20].
  2. Второй подход основан на включении дУТФ во вторую цепь кДНК. Помеченная цепь может быть деградирована непосредственно перед амплификацией с помощью урацил-ДНК-гликозилазы[англ.] — фермента, который выщепляет урацил из ДНК, содержащей дУТФ. Считается, что этот метод наиболее эффективный из всех[13].
  3. Третий подход включает в себя несколько методов. В одном из них производят замену матрицы после отжига на неё случайного гексамерного праймера, содержащего тэг (короткую, до 20 п.о., уникальную последовательность)[21]. В другом методе (англ. breath adapter directional sequencing, BrAD-seq) в момент временного разделения цепей ДНК вводят последовательность с тэгом[22].

Амплификация и молекулярная маркировка

[править | править код]

Перед секвенированием кДНК её необходимо амплифицировать с помощью ПЦР. Непосредственно перед проведением ПЦР можно ввести молекулярные маркеры. Эта процедура особенно актуальна, если РНК в образце изначально немного, как, например, в случае секвенирования РНК одной клетки[13].

Секвенирование РНК для особых целей

[править | править код]

Измерение профиля экспрессии генов с помощью методов, основанных на использовании тэгов

[править | править код]

Секвенирование DGE (от англ. digital gene expression), или Tag-seq — это метод глубокого секвенирования, полученный из SAGE[англ.] (от англ. Serial Analysis of Gene Expression). Как и в SAGE, метод включает в себя присоединение мРНК за поли-А хвост к бусинам, покрытым олиго-dT-праймерами; синтез первой и второй цепи кДНК на бусинах; расщепление двуцепочечной кДНК часто щепящей эндонуклеазой рестрикции. Оставшийся 3'-конец, который присоединен к бусинам, лигируется со своим адаптером, находящимся на 5'-конце. В адаптере есть сайт узнавания для специфической эндонуклеазы рестрикции TE (от англ. tagging enzyme). TE расщепляет кДНК, в ходе чего образуется короткий тэг длинной 21 п. о., который затем лигируется со следующим адаптером, находящимся на 3'-конце. кДНК амплифицируется с помощью ПЦР и секвенируется. Так как секвенируется только короткий тэг из целого транскрипта, секвенирование DGE является более экономичным вариантом в сравнении со стандартным секвенированием РНК. Секвенирование DGE сохраняет информацию о том, какая из цепей кДНК соответствует исходной РНК. Также этот метод находит широкое применение в случае, если полноразмерный геном или транскриптом организма недоступен для полноразмерного выравнивания с прочтениями[англ.], полученными в ходе секвенирования[13][23].

Секвенирование 3'-концов включает в себя целый ряд методов, большинство из которых было специально разработано для поиска альтернативного сплайсинга и сайтов полиаденилирования у эукариот[13].

Прямое секвенирование РНК

[править | править код]

Так как обратная транскрипция РНК с помощью обратной транскриптазы дает большое число ошибок и артефактов, которые могут препятствовать корректному качественному и количественному анализу транскриптов[24], компанией Helicos была начата разработка технологии мономолекулярного прямого секвенирования РНК (англ. Direct RNA Sequencing, DRSTM). Этот метод предполагает секвенирование РНК массово-параллельным образом, без получения кДНК, лигирования, амплификации и других процедур, которые могут изменить образец[25].

Проблемы

[править | править код]

Основная проблема технологии RNA-seq заключается в том, что исходно неизвестно, какому транскрипту соответствует прочитанный фрагмент. Особенно сложно решить данную проблему в случае исследования транскриптома высших эукариот с частым альтернативным сплайсингом и присутствием в геноме большого числа паралогов. Существует два подхода для восстановления транскриптов по прочитанным фрагментам: картирование на геном отдельных прочитанных фрагментов[26] или восстановление структуры транскрипта de novo[англ.] с последующим картированием полноразмерного транскрипта на геном[27].

Применение

[править | править код]

Определение профиля экспрессии генов

[править | править код]

Метод секвенирования РНК становится основным методом определения того, какие гены и на каком уровне экспрессируются в клетке. С помощью РНК секвенирования можно определять различия в экспрессии генов на различных стадиях развития организма[28] или в разных тканях[29]. Например, разработан метод локализации in situ последовательностей РНК-транскриптов с помощью флуоресцентного секвенирования (англ. Fluorescent in situ Sequencing, FISSEQ[англ.]), который позволяет изучать фенотип клеток и регуляцию активности генов непосредственно в биологическом образце (на срезах тканей)[30][30]. Также можно определить, транскрипция каких генов изменяется при развитии болезней и рака[31]. В связи с удешевлением методов секвенирования нового поколения появилась возможность определять экспрессию генов у любого человека для диагностики заболеваний. Наряду с секвенированием РНК для измерения профиля экспрессии генов также широко используется кэп-анализ экспрессии генов[32].

Определение мест альтернативного сплайсинга и выявление однонуклеотидных полиморфизмов

[править | править код]

Секвенирование РНК — наиболее удобный способ определения мест альтернативного сплайсинга, а также количественного соотношения различных альтернативных форм транскрипта[33][34]. Другие методы не позволяют картировать места альтернативного сплайсинга на всем протяжении генома. Также как и определение экспрессии генов, определение соотношения альтернативных форм транскриптов можно проводить на различных стадиях развития организма или в разных тканях.

РНК-секвенирование позволяет различить транскрипты с отличием в одном нуклеотиде, поэтому может быть использовано как для выявления экспрессируемых однонуклеотидных полиморфизмов в генах, так и для изучения процесса редактирования РНК[35][36].

Изучение редактирования РНК

[править | править код]
См. также: Редактирование РНК

Редактирование РНК — процесс пост- или ко- транскрипционной модификации рибонуклеотидов в молекуле РНК. В большинстве случаев редактирование РНК приводит к замене аденозина инозином[36]; катализаторами указанных изменений являются белки семейства ADAR[англ.]. В дальнейшем инозин распознаётся клеточной машинерией (например, рибосомой) как гуанозин, что приводит к возникновению различий между закодированной в геноме информацией и её интерпретацией[37].

Основным методом выявления внесённых изменений является сравнение последовательности нуклеотидов геномной ДНК и соответствующих участков РНК[38].

Важным прогностическим признаком обнаружения сайтов редактирования РНК является наличие эволюционно консервативных нуклеотидных последовательностей в окружении места редактирования[39].

Вследствие значительного прогресса в развитии методов массового параллельного секвенирования стало технически возможным проводить секвенирование полного транскриптома исследуемого организма с целью выявления связанных с редактированием РНК событий. Однако в силу генетического разнообразия наличие различий в определённой позиции между последовательностью РНК и референсным геномом[англ.] не означает присутствия сайта редактирования в этой позиции, так как идентификация сайтов редактирования РНК подразумевает секвенирование как геномной ДНК, так и кДНК, выделенных из одного и того же организма. Также необходимо принимать во внимание то, что уровни редактирования РНК различаются в разных тканях организма[40].

Для упрощения процедуры идентификации сайтов редактирования РНК предпринимаются попытки разработать программные пакеты, использующие только транскриптомные данные и не требующие секвенирования геномной ДНК. Возможным решением может послужить программное обеспечение GIREMI[41] (англ. Genome-independent Identification of RNA Editing by Mutual Information), которое способно детектировать сайты редактирования РНК, используя исключительно последовательности транскриптов[42].

РНК-секвенирование раковых транскриптомов

[править | править код]

РНК-секвенирование широко используется в настоящее время для исследование особенностей транскриптома раковых клеток, в том числе появление химерных транскриптов[43] и продуктов альтернативного сплайсинга, специфичных для раковых клеток[44].

Детекция гибридных генов

[править | править код]

Гибридизация генов происходит из-за различных структурных модификаций в геноме и может быть связана с раком[45]. Возможность анализировать весь транскриптом образца с помощью секвенирования РНК делает этот метод привлекательным для поиска подобных частых преобразований при раковой трансформации клеток[43].

ENCODE и modENCODE

[править | править код]
Основная статья: ENCODE

Секвенирование РНК является одним из основных методов исследований, проводимых в рамках проектов ENCODE и modENCODE, направленных на создание базы данных элементов генома человека[46] и основных модельных объектов молекулярной биологии[47][48].

Примечания

[править | править код]
  1. ↑ Haas Brian J, Zody Michael C. Advancing RNA-Seq analysis (англ.) // Nature Biotechnology. — 2010. — May (vol. 28, no. 5). — P. 421—423. — ISSN 1087-0156. — doi:10.1038/nbt0510-421. [исправить]
  2. ↑ Marioni J. C., Mason C. E., Mane S. M., Stephens M., Gilad Y. RNA-seq: An assessment of technical reproducibility and comparison with gene expression arrays (англ.) // Genome Research. — 2008. — 30 July (vol. 18, no. 9). — P. 1509—1517. — ISSN 1088-9051. — doi:10.1101/gr.079558.108. [исправить]
  3. ↑ Nookaew Intawat, Papini Marta, Pornputtapong Natapol, Scalcinati Gionata, Fagerberg Linn, Uhlén Matthias, Nielsen Jens. A comprehensive comparison of RNA-Seq-based transcriptome analysis from reads to differential gene expression and cross-comparison with microarrays: a case study in Saccharomyces cerevisiae (англ.) // Nucleic Acids Research. — 2012. — 8 September (vol. 40, no. 20). — P. 10084—10097. — ISSN 1362-4962. — doi:10.1093/nar/gks804. [исправить]
  4. ↑ Li Dong, Tian Lifeng, Hakonarson Hakon. Increasing diagnostic yield by RNA-Sequencing in rare disease—bypass hurdles of interpreting intronic or splice-altering variants (англ.) // Annals of Translational Medicine. — 2018. — April (vol. 6, no. 7). — P. 126—126. — ISSN 2305-5839. — doi:10.21037/atm.2018.01.14. [исправить]
  5. ↑ Shalek Alex K., Benson Mikael. Single-cell analyses to tailor treatments (англ.) // Science Translational Medicine. — 2017. — 20 September (vol. 9, no. 408). — P. eaan4730. — ISSN 1946-6234. — doi:10.1126/scitranslmed.aan4730. [исправить]
  6. ↑ Margulies Marcel, Egholm Michael, Altman William E., Attiya Said, Bader Joel S., Bemben Lisa A., Berka Jan, Braverman Michael S., Chen Yi-Ju, Chen Zhoutao, Dewell Scott B., Du Lei, Fierro Joseph M., Gomes Xavier V., Godwin Brian C., He Wen, Helgesen Scott, Ho Chun He, Irzyk Gerard P., Jando Szilveszter C., Alenquer Maria L. I., Jarvie Thomas P., Jirage Kshama B., Kim Jong-Bum, Knight James R., Lanza Janna R., Leamon John H., Lefkowitz Steven M., Lei Ming, Li Jing, Lohman Kenton L., Lu Hong, Makhijani Vinod B., McDade Keith E., McKenna Michael P., Myers Eugene W., Nickerson Elizabeth, Nobile John R., Plant Ramona, Puc Bernard P., Ronan Michael T., Roth George T., Sarkis Gary J., Simons Jan Fredrik, Simpson John W., Srinivasan Maithreyan, Tartaro Karrie R., Tomasz Alexander, Vogt Kari A., Volkmer Greg A., Wang Shally H., Wang Yong, Weiner Michael P., Yu Pengguang, Begley Richard F., Rothberg Jonathan M. Genome sequencing in microfabricated high-density picolitre reactors (англ.) // Nature. — 2005. — 31 July (vol. 437, no. 7057). — P. 376—380. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature03959. [исправить]
  7. ↑ Bennett Simon T, Barnes Colin, Cox Anthony, Davies Lisa, Brown Clive. Toward the $1000 human genome (англ.) // Pharmacogenomics. — 2005. — July (vol. 6, no. 4). — P. 373—382. — ISSN 1462-2416. — doi:10.1517/14622416.6.4.373. [исправить]
  8. ↑ Nagalakshmi U., Wang Z., Waern K., Shou C., Raha D., Gerstein M., Snyder M. The Transcriptional Landscape of the Yeast Genome Defined by RNA Sequencing (англ.) // Science. — 2008. — 6 June (vol. 320, no. 5881). — P. 1344—1349. — ISSN 0036-8075. — doi:10.1126/science.1158441. [исправить]
  9. ↑ Lister Ryan, O'Malley Ronan C., Tonti-Filippini Julian, Gregory Brian D., Berry Charles C., Millar A. Harvey, Ecker Joseph R. Highly Integrated Single-Base Resolution Maps of the Epigenome in Arabidopsis (англ.) // Cell. — 2008. — May (vol. 133, no. 3). — P. 523—536. — ISSN 0092-8674. — doi:10.1016/j.cell.2008.03.029. [исправить]
  10. ↑ Mortazavi Ali, Williams Brian A, McCue Kenneth, Schaeffer Lorian, Wold Barbara. Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-Seq (англ.) // Nature Methods. — 2008. — 30 May (vol. 5, no. 7). — P. 621—628. — ISSN 1548-7091. — doi:10.1038/nmeth.1226. [исправить]
  11. ↑ Metzker Michael L. Sequencing technologies — the next generation (англ.) // Nature Reviews Genetics. — 2009. — 8 December (vol. 11, no. 1). — P. 31—46. — ISSN 1471-0056. — doi:10.1038/nrg2626. [исправить]
  12. ↑ Oliver Smith , Glenn Dunshea, Mikkel-Holger S. Sinding, Sergey Fedorov, Mietje Germonpre, Hervé Bocherens, M. T. P. Gilbert. Ancient RNA from Late Pleistocene permafrost and historical canids shows tissue-specific transcriptome survival Архивная копия от 3 августа 2019 на Wayback Machine, July 30, 2019
  13. ↑ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Hrdlickova Radmila, Toloue Masoud, Tian Bin. RNA-Seq methods for transcriptome analysis (англ.) // Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA. — 2016. — 19 May (vol. 8, no. 1). — P. e1364. — ISSN 1757-7004. — doi:10.1002/wrna.1364. [исправить]
  14. ↑ Extraction/mRNA Isolation Protocols. www.protocol-online.org. Дата обращения: 6 мая 2019. Архивировано 24 сентября 2015 года.
  15. ↑ Uzman A. Molecular Cell Biology (4th edition) Harvey Lodish, Arnold Berk, S. Lawrence Zipursky, Paul Matsudaira, David Baltimore and James Darnell; Freeman & Co., New York, NY, 2000, 1084 pp., list price $102.25, ISBN 0-7167-3136-3 (англ.) // Biochemistry and Molecular Biology Education. — 2001. — Vol. 29, no. 3. — P. 126—128. — ISSN 1470-8175. — doi:10.1016/S1470-8175(01)00023-6. [исправить]
  16. ↑ Archer Stuart K., Shirokikh Nikolay E., Preiss Thomas. Probe-Directed Degradation (PDD) for Flexible Removal of Unwanted cDNA Sequences from RNA-Seq Libraries (англ.) // Current Protocols in Human Genetics. — 2015. — 1 April. — P. 11.15.1—11.15.36. — ISBN 9780471142904. — doi:10.1002/0471142905.hg1115s85. [исправить]
  17. ↑ Archer Stuart K, Shirokikh Nikolay E, Preiss Thomas. Selective and flexible depletion of problematic sequences from RNA-seq libraries at the cDNA stage (англ.) // BMC Genomics. — 2014. — Vol. 15, no. 1. — P. 401. — ISSN 1471-2164. — doi:10.1186/1471-2164-15-401. [исправить]
  18. ↑ Фермент TEX. Дата обращения: 3 мая 2019. Архивировано 3 мая 2019 года.
  19. ↑ Sharma Cynthia M., Hoffmann Steve, Darfeuille Fabien, Reignier Jérémy, Findeiß Sven, Sittka Alexandra, Chabas Sandrine, Reiche Kristin, Hackermüller Jörg, Reinhardt Richard, Stadler Peter F., Vogel Jörg. The primary transcriptome of the major human pathogen Helicobacter pylori (англ.) // Nature. — 2010. — 17 February (vol. 464, no. 7286). — P. 250—255. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature08756. [исправить]
  20. ↑ Hafner Markus, Landgraf Pablo, Ludwig Janos, Rice Amanda, Ojo Tolulope, Lin Carolina, Holoch Daniel, Lim Cindy, Tuschl Thomas. Identification of microRNAs and other small regulatory RNAs using cDNA library sequencing (англ.) // Methods. — 2008. — January (vol. 44, no. 1). — P. 3—12. — ISSN 1046-2023. — doi:10.1016/j.ymeth.2007.09.009. [исправить]
  21. ↑ Langevin Stanley A., Bent Zachary W., Solberg Owen D., Curtis Deanna J., Lane Pamela D., Williams Kelly P., Schoeniger Joseph S., Sinha Anupama, Lane Todd W., Branda Steven S. Peregrine (англ.) // RNA Biology. — 2013. — April (vol. 10, no. 4). — P. 502—515. — ISSN 1547-6286. — doi:10.4161/rna.24284. [исправить]
  22. ↑ Townsley Brad T., Covington Michael F., Ichihashi Yasunori, Zumstein Kristina, Sinha Neelima R. BrAD-seq: Breath Adapter Directional sequencing: a streamlined, ultra-simple and fast library preparation protocol for strand specific mRNA library construction (англ.) // Frontiers in Plant Science. — 2015. — 22 May (vol. 6). — ISSN 1664-462X. — doi:10.3389/fpls.2015.00366. [исправить]
  23. ↑ Chen En-Qiang, Bai Lang, Gong Dao-Yin, Tang Hong. Employment of digital gene expression profiling to identify potential pathogenic and therapeutic targets of fulminant hepatic failure (англ.) // Journal of Translational Medicine. — 2015. — Vol. 13, no. 1. — P. 22. — ISSN 1479-5876. — doi:10.1186/s12967-015-0380-9. [исправить]
  24. ↑ Liu Donglin, Graber JoelH. [1] (англ.) // BMC Bioinformatics. — 2006. — Vol. 7, no. 1. — P. 77. — ISSN 1471-2105. — doi:10.1186/1471-2105-7-77. [исправить]
  25. ↑ Ozsolak Fatih, Platt Adam R., Jones Dan R., Reifenberger Jeffrey G., Sass Lauryn E., McInerney Peter, Thompson John F., Bowers Jayson, Jarosz Mirna, Milos Patrice M. Direct RNA sequencing (англ.) // Nature. — 2009. — 23 September (vol. 461, no. 7265). — P. 814—818. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature08390. [исправить]
  26. ↑ Trapnell Cole, Williams Brian A, Pertea Geo, Mortazavi Ali, Kwan Gordon, van Baren Marijke J, Salzberg Steven L, Wold Barbara J, Pachter Lior. Transcript assembly and quantification by RNA-Seq reveals unannotated transcripts and isoform switching during cell differentiation (англ.) // Nature Biotechnology. — 2010. — May (vol. 28, no. 5). — P. 511—515. — ISSN 1087-0156. — doi:10.1038/nbt.1621. [исправить]
  27. ↑ Birol I., Jackman S. D., Nielsen C. B., Qian J. Q., Varhol R., Stazyk G., Morin R. D., Zhao Y., Hirst M., Schein J. E., Horsman D. E., Connors J. M., Gascoyne R. D., Marra M. A., Jones S. J. M. De novo transcriptome assembly with ABySS (англ.) // Bioinformatics. — 2009. — 15 June (vol. 25, no. 21). — P. 2872—2877. — ISSN 1367-4803. — doi:10.1093/bioinformatics/btp367. [исправить]
  28. ↑ Graveley Brenton R., Brooks Angela N., Carlson Joseph W., Duff Michael O., Landolin Jane M., Yang Li, Artieri Carlo G., van Baren Marijke J., Boley Nathan, Booth Benjamin W., Brown James B., Cherbas Lucy, Davis Carrie A., Dobin Alex, Li Renhua, Lin Wei, Malone John H., Mattiuzzo Nicolas R., Miller David, Sturgill David, Tuch Brian B., Zaleski Chris, Zhang Dayu, Blanchette Marco, Dudoit Sandrine, Eads Brian, Green Richard E., Hammonds Ann, Jiang Lichun, Kapranov Phil, Langton Laura, Perrimon Norbert, Sandler Jeremy E., Wan Kenneth H., Willingham Aarron, Zhang Yu, Zou Yi, Andrews Justen, Bickel Peter J., Brenner Steven E., Brent Michael R., Cherbas Peter, Gingeras Thomas R., Hoskins Roger A., Kaufman Thomas C., Oliver Brian, Celniker Susan E. The developmental transcriptome of Drosophila melanogaster (англ.) // Nature. — 2010. — 22 December (vol. 471, no. 7339). — P. 473—479. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature09715. [исправить]
  29. ↑ Xie Linglin, Weichel Brent, Ohm Joyce, Zhang Ke. An integrative analysis of DNA methylation and RNA-Seq data for human heart, kidney and liver (англ.) // BMC Systems Biology. — 2011. — Vol. 5, no. Suppl 3. — P. S4. — ISSN 1752-0509. — doi:10.1186/1752-0509-5-S3-S4. [исправить]
  30. ↑ 1 2 Lee J. H., Daugharthy E. R., Scheiman J., Kalhor R., Yang J. L., Ferrante T. C., Terry R., Jeanty S. S. F., Li C., Amamoto R., Peters D. T., Turczyk B. M., Marblestone A. H., Inverso S. A., Bernard A., Mali P., Rios X., Aach J., Church G. M. Highly Multiplexed Subcellular RNA Sequencing in Situ (англ.) // Science. — 2014. — 27 February (vol. 343, no. 6177). — P. 1360—1363. — ISSN 0036-8075. — doi:10.1126/science.1250212. [исправить]
  31. ↑ Jakhesara Subhash J., Koringa Prakash G., Bhatt Vaibhav D., Shah Tejas M., Vangipuram Shankar, Shah Siddharth, Joshi Chaitanya G. RNA-Seq reveals differentially expressed isoforms and novel splice variants in buccal mucosal cancer (англ.) // Gene. — 2013. — March (vol. 516, no. 1). — P. 24—32. — ISSN 0378-1119. — doi:10.1016/j.gene.2012.11.079. [исправить]
  32. ↑ Adiconis Xian, Haber Adam L., Simmons Sean K., Levy Moonshine Ami, Ji Zhe, Busby Michele A., Shi Xi, Jacques Justin, Lancaster Madeline A., Pan Jen Q., Regev Aviv, Levin Joshua Z. Comprehensive comparative analysis of 5′-end RNA-sequencing methods (англ.) // Nature Methods. — 2018. — 4 June (vol. 15, no. 7). — P. 505—511. — ISSN 1548-7091. — doi:10.1038/s41592-018-0014-2. [исправить]
  33. ↑ Wang Weichen, Qin Zhiyi, Feng Zhixing, Wang Xi, Zhang Xuegong. Identifying differentially spliced genes from two groups of RNA-seq samples (англ.) // Gene. — 2013. — April (vol. 518, no. 1). — P. 164—170. — ISSN 0378-1119. — doi:10.1016/j.gene.2012.11.045. [исправить]
  34. ↑ Liu Qi, Chen Chong, Shen Enjian, Zhao Fangqing, Sun Zhongsheng, Wu Jinyu. Detection, annotation and visualization of alternative splicing from RNA-Seq data with SplicingViewer (англ.) // Genomics. — 2012. — March (vol. 99, no. 3). — P. 178—182. — ISSN 0888-7543. — doi:10.1016/j.ygeno.2011.12.003. [исправить]
  35. ↑ Park E., Williams B., Wold B. J., Mortazavi A. RNA editing in the human ENCODE RNA-seq data (англ.) // Genome Research. — 2012. — 1 September (vol. 22, no. 9). — P. 1626—1633. — ISSN 1088-9051. — doi:10.1101/gr.134957.111. [исправить]
  36. ↑ 1 2 Peng Zhiyu, Cheng Yanbing, Tan Bertrand Chin-Ming, Kang Lin, Tian Zhijian, Zhu Yuankun, Zhang Wenwei, Liang Yu, Hu Xueda, Tan Xuemei, Guo Jing, Dong Zirui, Liang Yan, Bao Li, Wang Jun. Comprehensive analysis of RNA-Seq data reveals extensive RNA editing in a human transcriptome (англ.) // Nature Biotechnology. — 2012. — 12 February (vol. 30, no. 3). — P. 253—260. — ISSN 1087-0156. — doi:10.1038/nbt.2122. [исправить]
  37. ↑ Pullirsch Dieter, Jantsch Michael F. Proteome diversification by adenosine to inosine RNA-editing (англ.) // RNA Biology. — 2010. — March (vol. 7, no. 2). — P. 205—212. — ISSN 1547-6286. — doi:10.4161/rna.7.2.11286. [исправить]
  38. ↑ Bahn J. H., Lee J.-H., Li G., Greer C., Peng G., Xiao X. Accurate identification of A-to-I RNA editing in human by transcriptome sequencing (англ.) // Genome Research. — 2011. — 29 September (vol. 22, no. 1). — P. 142—150. — ISSN 1088-9051. — doi:10.1101/gr.124107.111. [исправить]
  39. ↑ Clutterbuck D. R., Leroy A., O'Connell M. A., Semple C. A. M. A bioinformatic screen for novel A-I RNA editing sites reveals recoding editing in BC10 (англ.) // Bioinformatics. — 2005. — 29 March (vol. 21, no. 11). — P. 2590—2595. — ISSN 1367-4803. — doi:10.1093/bioinformatics/bti411. [исправить]
  40. ↑ Eisenberg Eli, Li Jin Billy, Levanon Erez Y. Sequence based identification of RNA editing sites (англ.) // RNA Biology. — 2010. — March (vol. 7, no. 2). — P. 248—252. — ISSN 1547-6286. — doi:10.4161/rna.7.2.11565. [исправить]
  41. ↑ Программа GIREMI. Дата обращения: 30 апреля 2015. Архивировано 4 марта 2016 года.
  42. ↑ Zhang Qing, Xiao Xinshu. Genome sequence–independent identification of RNA editing sites (англ.) // Nature Methods. — 2015. — 2 March (vol. 12, no. 4). — P. 347—350. — ISSN 1548-7091. — doi:10.1038/nmeth.3314. [исправить]
  43. ↑ 1 2 Maher Christopher A., Kumar-Sinha Chandan, Cao Xuhong, Kalyana-Sundaram Shanker, Han Bo, Jing Xiaojun, Sam Lee, Barrette Terrence, Palanisamy Nallasivam, Chinnaiyan Arul M. Transcriptome sequencing to detect gene fusions in cancer (англ.) // Nature. — 2009. — 11 January (vol. 458, no. 7234). — P. 97—101. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature07638. [исправить]
  44. ↑ Feng Huijuan, Qin Zhiyi, Zhang Xuegong. Opportunities and methods for studying alternative splicing in cancer with RNA-Seq (англ.) // Cancer Letters. — 2013. — November (vol. 340, no. 2). — P. 179—191. — ISSN 0304-3835. — doi:10.1016/j.canlet.2012.11.010. [исправить]
  45. ↑ Teixeira Manuel R. Recurrent Fusion Oncogenes in Carcinomas (англ.) // Critical Reviews™ in Oncogenesis. — 2006. — Vol. 12, no. 3-4. — P. 257—271. — ISSN 0893-9675. — doi:10.1615/CritRevOncog.v12.i3-4.40. [исправить]
  46. ↑ The ENCODE Project Consortium. An integrated encyclopedia of DNA elements in the human genome (англ.) // Nature. — 2012. — September (vol. 489, no. 7414). — P. 57—74. — ISSN 0028-0836. — doi:10.1038/nature11247. [исправить]
  47. ↑ Gerstein M. B., Lu Z. J., Van Nostrand E. L., Cheng C., Arshinoff B. I., Liu T., Yip K. Y., Robilotto R., Rechtsteiner A., Ikegami K., Alves P., Chateigner A., Perry M., Morris M., Auerbach R. K., Feng X., Leng J., Vielle A., Niu W., Rhrissorrakrai K., Agarwal A., Alexander R. P., Barber G., Brdlik C. M., Brennan J., Brouillet J. J., Carr A., Cheung M.-S., Clawson H., Contrino S., Dannenberg L. O., Dernburg A. F., Desai A., Dick L., Dose A. C., Du J., Egelhofer T., Ercan S., Euskirchen G., Ewing B., Feingold E. A., Gassmann R., Good P. J., Green P., Gullier F., Gutwein M., Guyer M. S., Habegger L., Han T., Henikoff J. G., Henz S. R., Hinrichs A., Holster H., Hyman T., Iniguez A. L., Janette J., Jensen M., Kato M., Kent W. J., Kephart E., Khivansara V., Khurana E., Kim J. K., Kolasinska-Zwierz P., Lai E. C., Latorre I., Leahey A., Lewis S., Lloyd P., Lochovsky L., Lowdon R. F., Lubling Y., Lyne R., MacCoss M., Mackowiak S. D., Mangone M., McKay S., Mecenas D., Merrihew G., Miller D. M., Muroyama A., Murray J. I., Ooi S.-L., Pham H., Phippen T., Preston E. A., Rajewsky N., Ratsch G., Rosenbaum H., Rozowsky J., Rutherford K., Ruzanov P., Sarov M., Sasidharan R., Sboner A., Scheid P., Segal E., Shin H., Shou C., Slack F. J., Slightam C., Smith R., Spencer W. C., Stinson E. O., Taing S., Takasaki T., Vafeados D., Voronina K., Wang G., Washington N. L., Whittle C. M., Wu B., Yan K.-K., Zeller G., Zha Z., Zhong M., Zhou X., Ahringer J., Strome S., Gunsalus K. C., Micklem G., Liu X. S., Reinke V., Kim S. K., Hillier L. W., Henikoff S., Piano F., Snyder M., Stein L., Lieb J. D., Waterston R. H., modENCODE Consortium. Integrative Analysis of the Caenorhabditis elegans Genome by the modENCODE Project (англ.) // Science. — 2010. — 22 December (vol. 330, no. 6012). — P. 1775—1787. — ISSN 0036-8075. — doi:10.1126/science.1196914. [исправить]
  48. ↑ The modENCODE Consortium, Roy S., Ernst J., Kharchenko P. V., Kheradpour P., Negre N., Eaton M. L., Landolin J. M., Bristow C. A., Ma L., Lin M. F., Washietl S., Arshinoff B. I., Ay F., Meyer P. E., Robine N., Washington N. L., Di Stefano L., Berezikov E., Brown C. D., Candeias R., Carlson J. W., Carr A., Jungreis I., Marbach D., Sealfon R., Tolstorukov M. Y., Will S., Alekseyenko A. A., Artieri C., Booth B. W., Brooks A. N., Dai Q., Davis C. A., Duff M. O., Feng X., Gorchakov A. A., Gu T., Henikoff J. G., Kapranov P., Li R., MacAlpine H. K., Malone J., Minoda A., Nordman J., Okamura K., Perry M., Powell S. K., Riddle N. C., Sakai A., Samsonova A., Sandler J. E., Schwartz Y. B., Sher N., Spokony R., Sturgill D., van Baren M., Wan K. H., Yang L., Yu C., Feingold E., Good P., Guyer M., Lowdon R., Ahmad K., Andrews J., Berger B., Brenner S. E., Brent M. R., Cherbas L., Elgin S. C. R., Gingeras T. R., Grossman R., Hoskins R. A., Kaufman T. C., Kent W., Kuroda M. I., Orr-Weaver T., Perrimon N., Pirrotta V., Posakony J. W., Ren B., Russell S., Cherbas P., Graveley B. R., Lewis S., Micklem G., Oliver B., Park P. J., Celniker S. E., Henikoff S., Karpen G. H., Lai E. C., MacAlpine D. M., Stein L. D., White K. P., Kellis M., Acevedo D., Auburn R., Barber G., Bellen H. J., Bishop E. P., Bryson T. D., Chateigner A., Chen J., Clawson H., Comstock C. L. G., Contrino S., DeNapoli L. C., Ding Q., Dobin A., Domanus M. H., Drenkow J., Dudoit S., Dumais J., Eng T., Fagegaltier D., Gadel S. E., Ghosh S., Guillier F., Hanley D., Hannon G. J., Hansen K. D., Heinz E., Hinrichs A. S., Hirst M., Jha S., Jiang L., Jung Y. L., Kashevsky H., Kennedy C. D., Kephart E. T., Langton L., Lee O.-K., Li S., Li Z., Lin W., Linder-Basso D., Lloyd P., Lyne R., Marchetti S. E., Marra M., Mattiuzzo N. R., McKay S., Meyer F., Miller D., Miller S. W., Moore R. A., Morrison C. A., Prinz J. A., Rooks M., Moore R., Rutherford K. M., Ruzanov P., Scheftner D. A., Senderowicz L., Shah P. K., Shanower G., Smith R., Stinson E. O., Suchy S., Tenney A. E., Tian F., Venken K. J. T., Wang H., White R., Wilkening J., Willingham A. T., Zaleski C., Zha Z., Zhang D., Zhao Y., Zieba J. Identification of Functional Elements and Regulatory Circuits by Drosophila modENCODE (англ.) // Science. — 2010. — 22 December (vol. 330, no. 6012). — P. 1787—1797. — ISSN 0036-8075. — doi:10.1126/science.1198374. [исправить]

Литература

[править | править код]
Источник — https://ru.wikipedia.org/w/index.php?title=Секвенирование_РНК&oldid=128161065