Реактив Эллмана (Jygtmnf |llbgug)

Перейти к навигации Перейти к поиску
Реактив Эллмана
Изображение химической структуры
Общие
Систематическое
наименование
5-​​(3-​карбокси-​4-​нитрофенил)​дисульфанил-​2-​нитробензойная кислота
Сокращения ДТНБ; DTNB
Традиционные названия Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота)
Хим. формула C14H8N2O8S2
Физические свойства
Молярная масса 396,34 г/моль
Термические свойства
Температура
 • кипения 240 - 245 °C
Классификация
Рег. номер CAS 69-78-3
PubChem
Рег. номер EINECS 200-714-4
SMILES
InChI
ChEBI 86228
ChemSpider
Безопасность
Фразы риска (R) R36, R37, R38
Фразы безопасности (S) S26, S36
Краткие характер. опасности (H)
H315, H319, H335
Меры предостор. (P)
P261, P305, P338, P351
Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное.
Логотип Викисклада Медиафайлы на Викискладе

Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ)[1] — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[2]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году[3].

Приготовление

[править | править код]

В оригинальной статье Эллмана[2] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окислив их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.

Тест Эллмана

[править | править код]

При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.

Реакция ДНТБ с тиолом (R-SH).
Реакция ДНТБ с тиолом (R-SH).





Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определяться при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[4][5], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[5]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[3]. Коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[5].

Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион, при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови[6].

Реактив Эллмана используют при определении активности глутатионпероксидазы; при этом для измерения активности изоферментов с широкой тиоловой специфичностью может быть использован не только глутатион, но также цистеин и гомоцистеин, благодаря равноэффективности реактива Эллмана для определения концентрации любого из тиолов.[7]

Примечания

[править | править код]
  1. 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) Архивная копия от 16 июля 2011 на Wayback Machine at Sigma-Aldrich
  2. 1 2 Ellman G. L. Tissue sulfhydryl groups (англ.) // Archives of Biochemistry and Biophysics[англ.] : journal. — Elsevier, 1959. — Vol. 82, no. 1. — P. 70—7. — doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6. — PMID 13650640.
  3. 1 2 Riener C. K., Kada G., Gruber H. J. Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine (англ.) // Anal Bioanal Chem[англ.] : journal. — 2002. — Vol. 373, no. 4—5. — P. 266—276. — doi:10.1007/s00216-002-1347-2. — PMID 12110978.
  4. Collier H. B. Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate (англ.) // Anal. Biochem.[англ.] : journal. — 1973. — Vol. 56, no. 1. — P. 310—311. — doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6. — PMID 4764694.
  5. 1 2 3 Riddles P. W., Blakeley R. L., Zerner B. Reassessment of Ellman's reagent (англ.) // Meth. Enzymol. : journal. — 1983. — Vol. 91. Methods in Enzymology. — P. 49—60. — ISBN 978-0-12-181991-0. — doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. — PMID 6855597.
  6. Sedlak J., Lindsay R. H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent (англ.) // Anal. Biochem.[англ.] : journal. — 1968. — Vol. 25, no. 1. — P. 192—205. — doi:10.1016/0003-2697(68)90092-4. — PMID 4973948.
  7. Разыграев А.В., Таборская К.И., Петросян М.А., Тумасова Ж.Н. Тиолпероксидазные активности плазмы крови крыс, определяемые с использованием пероксида водорода и 5,5`-дитиобис(2-нитробензойной кислоты) (рус.) // Биомедицинская химия. — 2016. — Т. 62, вып. 4. — С. 431–438. — doi:10.18097/PBMC20166204431. Архивировано 12 декабря 2021 года.

Внешние ссылки

[править | править код]